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大黄注射液制备及其动物实验与临床运用

发布者：余南才工作室发布时间：2018-06-09 浏览量：379

大黄注射液制备及其动物实验与临床运用

余南才 , 孙翠华

(武汉市第一医院 430022)

提要采用固体分散物熔融法制备大黄提取物静脉注射液 ,并对药物含量及血液中药物浓度进行了测定。经动物实验及对临床慢性肾功能不全患者的治疗 ,除临床症状明显改善外 ,几项主要生化指标也有一定的疗效改变。

关键词大黄注射液 ; 动物实验; 临床运用

中图分类号: R283 文献标识码: B 文章编号: 1001-0805( 2000) 02-0122-02

大黄为我国常用中药 ,临床应用十分广泛 ^[1]。我院肾病研究室根据祖国医学理论和现代医学知识 ,试用大黄 Rheum offcinale Bail干燥根及根茎 ,制成静脉注射液 ,治疗慢性肾功能不全代偿期(氮质血症 )取得了初步的成效 ,经临床观察试用 ,给药后患者呈明显利尿作用 ,临床症状显著改善 ,并且几种主要的生化指标也有一定程度的改善 (如 BU N、 SCR、 CO R Hb)从而阻止肾功能继续恶

化 ,降低尿毒症的发病率 [2]。为了研究大黄注射液治疗肾功衰的作用机理 ,保证制剂质量 ,我们对大黄注射液的有效成分进行了研究 ,提取其主要成分大黄总蒽醌 ,采用固体分散物熔融法 [3] 制备大

黄注射液 ,并进行了血液中药物浓度的检测及注射液的含量测定等实验研究 ,现报道如下。

1 大黄注射液的制备

1. 1 大黄总蒽醌的提取: 取大黄饮片 (药用大黄购自武汉市药材公司 )粗粉碎 ,用 20% 硫酸浸渍 ,加氯仿回流提取 6次 , 2 h /次 ,合并氯仿液 ,减压回收至适量 ,用 5% Na HCO3 -5% Na O H混合液萃取数

次 ,碱液用盐酸调 p H 3,得深黄色沉淀 ,乙醇重结晶 ,得精制大黄总蒽醌。

1. 2 低共熔混合物的制备: 称取大黄总蒽醌 20 g ,与等量的尿素

置钳锅直火加热至共熔 ,倾出 ,在乳钵里用乳棒碾碎 ,得到很细 ,且均匀一致的低共熔混合物 ,即大黄总蒽醌一尿素共熔物。

1. 3 注射液的配制: 称取大黄蒽醌-尿素共熔物 40 g ,加注射用水

5 000 ml溶解 ,配制成每 ml含 4 mg 大黄蒽醌的溶液 ,加 0. 2% 活

性炭处理 ,过滤 ,得深黄色澄明液体 , 0. 8μm微孔薄膜精滤 ,封装于

100 m l盐水瓶中 , 110℃灭菌 30 min即得。

2 大黄注射液的质量标准

2. 1 鉴别

2. 1. 1 取本品 1 ml,加 10% N aO H 1 ml,振摇后显红色 ,加少量过氧化氢不褪色 ,加酸酸化褪色 ,加碱碱化又出现红色。

2. 1. 2 取本品少量滴在滤纸上 ,风干后喷 0. 5% 醋酸镁甲醇溶液 , 90℃烘 5 min显橙红色。

2. 3. 1 薄层制备: 取硅胶 G青岛海洋化工厂生产 ,加水适量调成糊状铺板 ,室温至干 ,于 110℃活化 30 min,备用。

2. 3. 2 样品制备: 分别取水煎醇沉大黄注射液 (样 1)和大黄蒽醌 - 尿素共熔物注射液 (样 2)各 20 ml,加 5 N 硫酸 30 ml,置直火上加热

回流 4 h ,然后用 20 ml氯仿依次萃取至氯仿层无色 ,合并氯仿液 , 浓缩至适当体积。

2. 3. 3 对照品制备: 大黄酚的氯仿液 (标 1) ,大黄素甲醚的氯仿液(标 2) ,大黄素的氯仿液 (标 3) ,大黄酸的氯仿液 (标 4)。

2. 3. 4 展开剂石油醚 -正已烷 -甲酸乙酯 -甲醇 ( 1 3 0. 2 1. 4 024)加水 0. 5 ml,振摇 1 min,分取上层液应用。

2. 3. 5 喷雾 0. 5% 醋酸镁甲醇溶液显橙红色 ,展开结果见图 1。

3 大黄注射液在血液中药物浓度测定

3. 1 实验方法: 取体重 3 kg 左右的家兔 4只实验前 12 h禁食 ,次

晨耳静脉注射给药 ,剂量 40 mg /kg ,给药后 0. 5, 1. 0, 2. 0, 4. 0, 8. 0 h 分别耳静脉取血 0. 5 m l,测定大黄总蒽醌血药浓度。

3. 2 标准曲线绘制: 精密称取 1, 8- 二羟基蒽醌 10 mg 于 100 ml 的容量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,分别吸取 0. 5, 1, 2, 3, 4, 5 ml 于 25 ml 容量瓶中 , 在水浴上蒸干甲醇 , 加 5% N aO H-2%

N H4O H( 1 1)混合碱液溶解并稀释至刻度 ,放置 1 h ,以混合碱液为空白 ,在 751G 分光光度计 510 nm 处测定 ,其数据及曲线见表 1、图 2。

2.	2	检查			表 1	大黄总蒽醌血药浓度
2.	2.	1	p H值: 按《中国药典》 1995年版附录 V II检查应为 5. 0～ 5. 5。
					取样量 v /ml	含量 m /mg	吸收值 A
2.	2.	2	热源: 按 1995版《中国药典》附录 X III热源检查法检查 ,剂
				0. 5		2	0.	076
量按家兔 10 ml μ/g 应符合规定。				1. 0		4	0.	158
				2. 0		8	0.	314
2.	2.	3	溶血试验: 按《上海药品标准》 1974年版 305页方法 ,应符合
				3. 0		12	0.	469
规定。
			其它应符合《中国药典》 1995年版 1部附录Ⅰ 注射剂项下各	4. 0		16	0.	631
2.	2.	4		5. 0		20	0.	719
项规定。

2.	2.	5	急性毒性: 小鼠 10只尾静脉注射 0. 5 ml,连续 3 d,观察 1周	收稿日期: 1999-08-16
无死亡现象。				作者简介: 余南才 ( 1951-) ,男 (汉族 ) ,湖北人 ,现任武汉市第一医
2.	3	薄层层析		院药物研究室 ,副主任药师.

122

LISHIZ HEN M EDICIN E AN D MA TERIA M EDICA RESEA RCH 2000 VO L. 11 NO. 2 时珍国医国药 2000年第 11卷第 2期


	A
1.	0	图 2


0.	8
0.	8
0.	6
0.	6
0.	4
0.	4
0.	2
0.	2


	2	4	8	12	16	20
			含量 m /mg

以上数据经直线回归求出相关系数 (γ)和直线方程

γ= 0. 999 8 ( P < 0. 01)

Y= 0. 002 6+ 0. 039X

3. 3 血液中药物浓度测定: 取醇醚混合液 ( 3 1) 5 ml,置离心管中 ,加入采取的血样 0. 5 ml,混合静置 15 min离心 ,沉淀再用醇醚混合液提取 2次 ,合并上清液 ,于锥形瓶中 ,水浴蒸干 ,加 20% 硫酸

20 ml回流水解 1 h,放冷后加入氯仿 15 ml,回流提取 2次 , 20 min / 次 ,合并氯仿液 ,水浴蒸干 ,加 5% NaO H, 2% N H4O H混合液 4 ml,

30 min后 ,在 510 nm 处测定 ,由标准曲线或回归方程式计算出大黄总蒽醌的血液中药物浓度 ,结果见表 2。

表 2	大黄注射液的家兔血液中药物浓度					μg /mg

样品			不同时间血药浓度

	0. 5 h	1. 0 h	2. 0 h	4. 0 h	6. 0 h	8. 0 h
	0. 5 h	1. 0 h	2. 0 h	4. 0 h	6. 0 h	8. 0 h
大黄蒽醌尿素液	11. 47	17. 83	16. 60	9. 93	6. 85	4. 2

4 大黄注射液的含量测定

4. 1 标准曲线的制备: 同前。

4. 2 大黄注射液的含量测定: 精密吸取大黄注射液 20 ml,加 5

N H2 SO4 30 ml 直火回流 4 h ,放冷加氯仿 20 ml,振摇萃取 ,分出氯仿液 ,再加 20 ml氯仿……反复萃取至氯仿液无色 ,合并氯仿液 , 依次用 20 ml 蒸馏水洗至水层无色 ,弃去水液 ,氯仿液用 5% N aO H-2% N H4 O H混合碱液振摇萃取数次 ,合并碱液 ,弃去氯仿液 ,将混合碱液在水浴上加热数 min,使残留氯仿挥尽 ,移入 500

ml容量瓶中 ,用混合碱溶液稀释至刻度 ,放置 1 h,以混合碱液为空白 ,在 510 nm处测定吸收度 ,计算含量 ,数据见表 3。

	表3	大黄注射液含量测定			n= 3

注射剂批号	大黄总蒽醌含			平均值	R SD
注射剂批号	量 /mg ml^{- 1}			/mg ml^{- 1}
	量 /mg ml^{- 1}			/mg ml^{- 1}	(% )
861204		0.	9266
870713		0.	9573	0. 9402	1. 66
870420		0.	9367
大黄注射液 (大黄蒽醌 - 尿素共溶物 ) A = 1.					473,相当于每

毫升含总蒽醌 0. 942 6 mg。

回收率试验结果见表 4。精密吸取 1, 8- 二羟基蒽醌液一定量 , 加入已测得含量的大黄注射液中 ,按含量测定方法测定。

			表4 大黄注射液加样回收率

序号	样品重量		加入量		总量		测得量		回收率 (% )^{均值回收率}
		/mg		/mg		/mg		/ mg		(% )
1	0.	919 2	0.	200 0	1.	119 2	1.	117 6	99. 85
2	0.	925 6	0.	200 0	1.	125 6	1.	128 5	100.	76
										100. 18
3	0.	912 6	0.	250 0	1.	162 6	1.	165 7	100.	27
4	0.	921 9	0.	250 0	1.	171 9	1.	175 8	100.	33

5 大黄注射液对大鼠尿量的影响

选体重 200 g 左右的雄性大鼠 24只 ,随机分成 4组 ,每组 6只 ,实

验前 24 h 禁食 ,以减少粪便的干扰 ,给予生理盐水按 2. 5 ml 100灌

胃 ,然后各组分别给大黄蒽醌一尿素注射液 ,大黄液和速尿注射液 ,一组设空白对照 ,收集尿液 1次 /h,连续观察 6 h,结果见表 5。

表 5 大黄注射液对大鼠尿量的影响

组别			给药后不同时间的尿量 v /ml								尿钠 m /mg 尿钾 m /mg 尿素氮 m /mg

	1h		2h		3h		4h	5h		6h	平均值		平均值		平均值
	1h		2h		3h		4h	5h		6h	平均值		平均值		平均值
大黄注射液	5.	9	6.	8	7.	1	8. 4	9		6. 7	243.	17	149.	0	196. 2
大黄液	1.	5	2.	8	2.	9	2. 8	2.	1	2. 3	133.	67	134.	0	136. 6
速尿注射液	18		10. 5		1		无	无		无	142.	96	120.	0	133. 6
生理盐水	2		1.	6	1.	5	1. 0	无		无	33.	0	10. 0		130. 0

6 大黄注射液对临床几项生化指标的影响

我院内科肾病研究室采用大黄静脉注射液治疗氮质血症 ,根据临床资料完整的病例统计 ,除临床症状改善 ,明显出现利尿作用

外 ,几项主要化验指标也有一定效果 ,结果见表 6。

表 6 大黄注射液对几项生化指标的影响

项	目		例数	治疗前总数				治疗后总数

尿素氮 c / mmol		_L- 1	17	23.		4± 4. 1		19.	3± 3. 2*
血清肌酐 c /μmol		_L- 1	11	524.		7± 60.	4	470.	2± 41. 1*
内生肌酐清除率			8	23.	65± 11.		1	25. 66± 11. 3 *
V /m l min- 1
血色素 c /g L^{- 1}			11	85.	56± 20.		1	67. 5± 22. 6

7 讨论

大黄的利尿作用从理论上来讲是符合祖国医学的消逐饮水。但由于大黄蒽醌类化合物皆难溶于水 ,采用“水醇法”制备大黄注射液对其主要成分有很大影响 ^{[3 ]}。我们用固体分散物的制法制备大黄蒽醌一尿素低共熔混合物 ,增加了大黄蒽醌的水溶性及溶解速率 ,制得注射液澄明稳定 ,生物利用度高 ,动物实验表明大黄蒽醌一尿素注射液血药浓度高 ,给药后 30 min 即起作用 , 1 h血液中药物浓度达到峰值。采用 1 8- 二羟基蒽醌为对照品 ,用 751 G型分光光度计测定大黄注射液水解后总蒽醌 ,结果与吸收度成正比关系 ,符合郎伯一比尔定律 ,按本法测得回收率为 100. 18% ,因此用本法可以对大黄注射液中结合蒽醌的测定。

大黄的水提取物能显著降低大鼠血清尿素氮 ( BUN )的浓

度 ^[4] ,利尿的主要有效成分为大黄素 ,大黄酸^[5
]。给药后尿管蠕动波增强 ,尿中钠、钾明显增强 ,大黄酚在体内可相继氧化为大黄素

和大黄酸 ,进一步起利尿作用且药理活性增强 ,最后与葡萄糖醛酸结合解毒而排出。通过初步的药理试验和临床几项生化指标的观察 ,说明大黄注射液对大白鼠的尿量有明显持续的增加作用。对人

体有一定降低 BU N , SC R和升高 O R, Hb 的作用 ,与文献报导基本一致。

慢性肾功能不全目前国内外尚无较好的治疗方法 ,最终发展成为尿毒症而死亡。我们采用固体分散法 ,以尿素为载体制成大黄

蒽醌 -尿素注射液试用于临床 ,除临床症状改善明显出现利尿作用外 ,几项主要生化指标也有一定效果。且质量稳定 ,每 ml含大黄蒽醌 4 mg ,提高了大黄蒽醌的溶解速率及溶解度 ,使吸收完全 ,产生

高效和速效 ,而且含量测定质量检验标准简便易行 ,是用来制备难溶性药物 ,提高生物利用度的一种较为适用的方法。

参考文献:

[1 ]	陈琼华. 大黄的实验研究与临床应用 [ J] . 新医药学杂志 , 1974, ( 5)
	34
[2 ]	Sekig uchik. et al. Chem. Bull. 1961, 9( 11) 866

[3 ] 郝淑清,王汝龙 ,何丽一 ,等. 大黄注射液的制备工艺对酉恩衍生物含量

	的影响 [ J ]. 中草药 , 1982,		13( 10) 38
[4 ]	.	:	ch em pham Bull	, 1981, 29 2862
	Gen Ichiro Nonaka et all		ch em pham Bull
[5 ]	Supniew ski JV: CA	32 9279, 19