槐角

本品为豆科植物槐Sophora japonica L. 的干燥成熟果实。栽培或野生。全国各地区均产。主要产于河北、山东、江苏、辽宁等地。冬季采收，除去杂质，干燥。药材以饱满、色黄绿、质柔润者为佳。

【处方用名】  槐角、蜜槐角、槐角炭。

【规范方法】  槐角  取原药材，除去杂质及果柄，筛净灰屑，长角掰断。

蜜槐角  取净槐角置锅内，用文火加热。炒至鼓起，再取炼蜜加适量开水稀释，喷洒均匀，炒至外皮光亮不粘手为度、取出放凉。

每槐角100kg，用炼蜜5kg。

槐角炭  取净槐角置热锅内，用武火加热，炒至表面焦黑色、内部黄褐色，喷淋清水少许，熄灭火星，取出凉透。

【药典方法】  槐角  除去杂质。

蜜槐角  先将炼蜜加适量开水稀释后，加入净槐角中拌匀，闷透，置锅内，用文火炒至外皮光亮、不粘手，取出，放凉。^[1]

每100kg槐角 ，用炼蜜5kg。

【量化方法】  槐角  取原药材，除去杂质及果柄，筛净灰屑，长角掰断。

蜜槐角  取净槐角，置锅底温度为160℃的锅内，不断翻动，当温度由136℃回升至156℃，药物表面鼓起，用时约4分半钟，出锅。再取药物重量5%的炼蜜，加入其重量10%的沸水，溶化后投入炒至鼓起的槐角，文火加热，当锅温由50℃回升至100℃，药物近干，不粘手时，用时约3分钟。取出烘干、放凉。

槐角炭  取净槐角，置锅底温度为230℃的锅内，不断翻动，当温度由175℃回升至250℃，药物外表呈焦黑色、内部焦褐色，用时约15分半钟，取出，熄灭火星，凉透。

药物炒用量   槐角炭350g  蜜槐角 250g。

【成品性状】  槐角  本品于种子间缢缩呈念珠状，多为黄褐色，表面皱缩、扁平而粗糙，一侧有一条称为“背缝线”的黄色带，种子肾形或扁椭圆形，棕黑色，有光泽，果实于缢缩处易折断，有豆腥气。

槐角炭  形如槐角，于种子间鼓起缢缩呈念珠状，外表焦黑色、内部深焦褐色，外荚手捏易碎，种子色黑，味苦。

蜜槐角  形如槐角，表面老黄色，有蜜样光泽，略鼓起，稍显粘性，气香，味甜。

【鉴别】

1．外观鉴别  本品呈连株状，长1～6cm，直径0.6～1cm。表面黄绿色或黄褐色，皱缩而粗糙，背缝线一侧呈黄色。质柔润，干燥皱缩，易在收缩处折断，断面黄绿色，有黏性。种子1～6粒，肾形，长约8mm,表面光滑，棕黑色，一侧有灰白色圆形种脐；质坚硬，子叶2 ，黄绿色。果肉气微，味苦，种子嚼之有豆腥气。

2．显微鉴别  粉末黄绿色。种皮栅状细胞成片或单个散在，横断面观细胞1列，壁较厚有纵沟纹，光辉带位于顶端。种皮滴漏细胞1列，侧面观呈现哑铃状。石细胞呈现类长方形或类多角形，胞腔裂缝状。石细胞呈类圆形或长圆形，胞腔裂缝状。石细胞呈现类长方形或类多角形，直径18～36μm，孔沟较粗而明显。草酸钙晶体存在于果皮细胞中，呈双锥形或菱形。

3．理化鉴别^[2]

3.1.取脱脂本品4g，用乙醇20ml回流30分钟，放冷，滤过。滤液减压浓缩至干，取浓缩物少许，加乙醇1ml溶解，加镁粉少量与盐酸3～4滴，显红色。

3.2.取本品粉末1g，加乙醇10ml，置水浴上加热5分钟，滤过。将滤液滴加在滤纸上，再加1滴试剂(含有1％盐酸的0.5％对-二甲基苯甲醛乙醇溶液)，斑点直径3mm，置100℃烘箱烘1分钟，芦丁即显黄色，灵敏度为5μg。

4.光谱鉴别

4.1. 取[理化鉴别1]项下乙醇提取浓缩物少许，用甲醇溶解点样，并以槐角苷、染料木素、山柰酚(槐角苷、染料木素用DMF溶解，山柰酚用甲醇溶解)作对照。点于聚酰胺薄膜上，用60％醋酸水溶液展开，展距10cm，于紫外光灯(365nm)下观察有荧光。^[2]

4.2.样品制备同上，用甲醇溶解点样。并以芸香苷作对照，吸附剂：纤维素粉(湿法铺板)，以正丁醇-水-冰醋酸(4：1：5)展开17.5cm，用5％三氯化铝乙醇液显色，于紫外光灯下观察有荧光。

4.4.取本品大蜜丸或小蜜丸2g､水蜜丸1.5g,蜜丸切碎,加等量硅藻土,研匀,水蜜丸研碎,加石油醚(30－60℃)20ml,浸渍2h,时时振摇,滤过,弃去石油醚液,挥干残渣,残渣加甲醇20ml，超声处理30min，滤过,滤液蒸干｡残渣加水0.5ml使溶解,装入一预先装填好的聚酰胺柱(聚酰胺2g,40目,内径0.8－1.0cm,干法装柱)上,用50mL水洗脱,弃去水液,再用50ml乙醇洗脱,收集洗脱液,蒸干｡残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液｡同法制备缺槐角的阴性对照样品溶液｡再取芦丁对照品,加甲醇制成1mg/ml的溶液,作为对照品溶液｡照薄层色谱法试验,吸取上述供试品溶液及阴性对照样品溶液各10μl,对照品溶液5μl,分别点于同一0.5%CMC-Na硅胶G薄层板上,以醋酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%三氯化铝乙醇溶液,用热风吹至斑点清晰,置紫外光灯(365nm)下检视｡供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点｡^[3]

4．5 精密称取60℃干燥6h的槐角丸粉末约1.75 g，置索氏提取器中，加甲醇70 ml，水浴回流至提取液无色(约12 h)，浓缩，定容至25 ml量瓶中。精密称取120℃干燥至恒重的芦丁对照品24. 87 mg，置25 ml量瓶中，再加甲醇至刻度，摇匀即得0. 994 8 mg/ml芦丁对照液，在聚酰胺薄膜上点一定量的芦丁对照液和槐角丸供试液，以乙酸乙酷一甲醇一甲酸((8. 5 : 1 : 1)展开，展距8 cm，冷风吹干后在紫外光灯(365nm)下观察，槐角丸与芦丁在相同位置上显暗黄褐色荧光斑点。^[4]

5．薄层鉴别

5.1. 取槐角丸1.2g，研细，加甲醇10ml，浸泡2小时，滤过，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液。另取芦丁对照品，加甲醇配制成每lml含0.1mg的溶液。作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅腔G薄层板上。以醋酸乙酯-甲酸-水(10：2：2 )为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％三氯化铝甲醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

5.2. 取本品粉末0.5g，加甲醇10ml，超声处理10min，静置，滤过，滤液作为供试品溶液。另取芦丁对照品加甲醇溶解制成每1mg/ml的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上．以醋酸乙酯-甲酸-水(8：1：1)展开，喷以1％三氯化铝的乙醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。^[5]

5.3. 取槐角炭及生品各10克，分别加甲醇50m1超声提取40分钟，过滤、滤渣再加50m1甲醇超声提取30分钟，过滤，合并两次滤液、用甲醇定容100m1，作为样品液备用。分别取芦丁和槲皮素对照品，加甲醇制成0.2mg/ml溶液作为对照品溶液备用。用硅胶GF₂₅₄加0.3%CMC制板，110℃活化30分钟。展开剂为乙酸乙醋:甲醇:水(8:1:1)。显色紫外灯(365nm)下检识，槐角炭在芦丁及槲皮素对照品斑点相应处均有荧光点;生品在槲皮素对照品斑点处无荧光斑点。^[6]

【含量测定】

1. 分光光度法测定槐角中芦丁的含量

1.1.对照品溶液制备    精称在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品200mg，置1000ml量瓶中，加甲醇70ml，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取10m|，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得含无水芦丁0.2mg/ ml 的对照液。

供试品溶液制备   精称在120℃减压干燥至恒重的芦丁样品200mg，置1000ml量瓶中，加甲醇70ml，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取10m|，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

样品测定    精密吸取供试品对照品溶液各3ml，置于25ml量瓶中，加水至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水稀释至刻度，摇匀放置15分钟．在UV200型分光光度计500nm波长处测定吸收度，并根据下列公式计算出样品中芦丁的含量。^[7]

芦丁(％) =X值（ml）×对照品重×稀释倍数/（样品重×稀释倍数）×100％

1.2.取槐角丸2.00g，置锥形瓶中，加乙醚100ml回流提取2小时，放冷。滤过。滤液加甲醇100ml，称重，回流提取2.5小时，放冷，用甲醇补至原重，滤过。弃初滤液．取续滤液100ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，取此稀释液3ml置25ml瓶中，加水6ml，5％NaNO2溶液1ml，摇匀，放置6分钟。加1％AI(NO3)3溶液1ml，摇匀，置6分钟，再加4％NaOH试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟。在500nm波长处测定吸收度，按标准曲线计算黄酮类化合物含量。^[8]

1.3用正交函数分光光度法测定槐角丸中芦丁和黄芩甙的含量^[9]

芦丁标准液的制备   精密称定120℃干燥至恒重的芦丁对照品用甲醇溶解成1mg/ml，即得。

样品溶液的制备   取槐角丸约3g剪碎，精称一定量，置圆底烧瓶中，加甲醇50ml，盖塞，精密称定后置80℃水浴中回流1h，冷却，擦净烧瓶外壁，盖塞，精密称定，补足损失甲醇量，静止，得样品回流液，精取50μl回流提取液，置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，即得。

芦丁提取液及对照液的制备   在硅胶G薄层板上分别点适量的芦丁标准液和50μl样品回流提取液，用乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5:4:0.5:1)溶剂系统展开，取出薄层板，挥尽溶剂，分别刮取与芦丁黄色斑点Rf值相同的样品处硅胶以及等量的空白硅胶，并分别置l0ml具塞离心试管中，加甲醇(2，2，1m1)振摇提取3次，经离心后，倾取上清液于5m!量瓶中，加甲醇至刻度。

测试条件及方法    在具塞石英比色皿中加入适量甲醇，向比色皿内滴加芦丁标准溶液，使其在最大吸收处的吸收度值(以甲醇做空白对照)与芦丁提取液的吸收度值(以相应的对照液做空白对照)相等。在紫外光区扫描该芦丁标准液，并以此为对照扫描样品溶液，得到样品中去掉芦丁的其它成分吸收曲线((0)。在两条吸收光谱有明显区别的240-270nm之间，每隔lnm测定两条光谱的吸收度值，并将其数据输入电子计算机，经过运算和条件筛选，在波长范围254 -260nm，间隔lnm，求7点二次正交多项式系数P值，可使其它成分P值等于零，从而消除其对芦丁含量测定的影响。

2. HPLC法

2.1.测定槐角苷的含量

2.1.2测试条件及方法:    C₁₈柱:10μYWG,ID4.0mm;流速:1.0ml/min;压力:147bar;温度:20℃; 洗脱剂:72%PH=2.73磷酸溶液+28%乙腈;检出:UV260nm｡进样量5µl,保留时间为4.4min｡

对照品溶液的制备    称取粗槐苷0.1620g,用90%乙醇加热溶解,趁热过滤,在冰箱中放置过夜,析出近白色粉末固体,抽滤,所得固体用95%乙醇洗涤,烘干,得近白色粉末72.2mg。用熔点测定仪测得其熔点为298.0℃～300.0℃。称取此品10.6mg,用甲醇溶解于50ml容量瓶中,移取25ml到另一50ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,即得浓度为106mg/l甲醇溶液

供试品溶液的制备    取本品粗粉50.6003g,用95%乙醇回流提取四次,每次350ml,每次2小时，合并提取液,浓缩至无乙醇味,得浸膏,混悬于100ml水中,先后用环己烷、二氯甲烷洗三次,然后用300ml乙酸乙酯分三次萃取,得乙酸乙酯可溶，两相溶剂界面的乙酸乙酯不溶和水三个部分，三部分分别作定性的HPLC分析,在乙酸乙酯可溶和不溶部分均检出槐苷,水部分几乎无槐苷峰｡称取乙酸乙酯可溶部分固体适量，用甲醇中配制成104.8mg/l.称取乙酸乙酯不溶部分的固体适量，用甲醇中配制成127.6mg/l。两份测定液在相同的条件下,进样量为5μl。[10]

2.2.2 色谱条件    色谱柱：YWG ODSC₁₈柱(250 mmx 4.6 mm, 10µ m );流动相:甲醇-乙腈-0.07%磷酸溶液(12: 20: 68);流速:0.9 ml/min，紫外检测波长:260 nm;进样量为10µl。理论板数以槐角昔峰计算，应不低于2500。

对照品溶液的制备   取槐角苷对照品适量，用甲醇溶解成0. 04 mg/mL的对照品溶液，用0. 45µ m的微孔滤膜过滤。

供试品溶液的制备   取本品末约2g，精密称定，置100 ml具塞瓶中，精密加人70%乙醇50ml，称重，超声处理45 min，用70%乙醇补足减失质量，摇匀，滤过，精密吸取滤液5 ml，置于200 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0. 45µm的微孔滤膜过滤。^[11]

2.2.测定黄芩苷含量

2.2.1.色谱条件   色谱柱:SpherigelC₁₈(4.6mm×200mm×5μm);流动相: 甲醇-水-冰醋酸(50∶50∶1)。检测波长:276nm;流速:1.0ml/min;柱温:室温;进样体积20μl。

样品溶液的制备  取本品1g剪碎,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入稀乙醇25ml,密塞,称定重量,超声处理30min,放冷,再称定重量,用稀乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取滤液,即得。

对照品溶液的制备  精称干燥至恒重的黄芩苷对照品用50%甲醇制成0.1 mg/ml溶液，即得。^[8]

2.2.2.测试条件及方法    流动相:甲醇 -水 -冰醋酸(45:55:1);流速:1.0ml/min;在此条件下黄芩苷峰的保留时间为 6.5min左右｡检测波长为 274nm,供试品及对照品用0.45μm微孔滤膜滤过,进样 10μl

对照品溶液的制备  精称60℃干燥 4h的对照品 12.5mg,置 25ml容量瓶中,加 50%甲醇适量,振摇使其溶解并用50%甲醇稀释至刻度,摇匀,超声除去气泡,用 50%甲醇补足至刻度。

供试品溶液的制备    取本品 9g,切碎,精称3g,加等量硅燥土,研匀，置 50ml容量瓶中,加 50%甲醇,超声处理 20min,放冷后加 50%甲醇至刻度,滤过,弃去初滤液,取续滤液即得。^[12]

2.3染料木素的含量^[13]

色谱条件与系统适用性试验   色谱柱:LunaC₁₈柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-水(60∶40);流速:1.0ml/min;检测波长:260nm;进样量:20μl;灵敏度:0.02AUFS;柱温:室温(27℃)。理论板数按染料木素峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备   精密称取减压干燥至恒重的染料木素对照品10.5mg于25ml量瓶中,加甲醇15ml超声处理5min,用甲醇稀释至刻度,配制成402μg/ml的染料木素母液。精密吸取适量于10ml量瓶中,加甲醇稀释成120μg/ml的溶液,经0.45μm滤膜滤过,即得。

供试品溶液的制备   取槐角提取物适量,精密称定,置50ml量瓶中,加甲醇15ml,超声处理5min,用甲醇稀释至刻度,制成0.12mg/ml的供试品溶液,摇匀,滤过,取续滤液过0.45μm滤膜,即得。

测定   分别取各供试品溶液和对照品溶液,各进样20μL,按外标法以峰面积计算,测定样品。

3． 高效毛细管电泳法测定槐角中芦丁的含量 ^[14]

测定条件及方法   运行缓冲液采用50mmol·L-1硼酸缓冲液和50mmol·l-1SDS,用磷酸调pH8 0;操作电压20kV,极性由正到负,检测波长260nm,柱温25℃;采用压力进样,常数为10psi×s｡运行缓冲液和样品溶液均经0.45μm微孔滤膜过滤后使用｡

对照品溶液的制备   精称在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品10.0mg,用甲醇溶解成1.0mg/ml的对照液;取此液250μl于1ml量瓶中,加运行缓冲液至刻度,即得｡

供试品溶液的制备    取本品细粉1.0g置25ml量瓶中,加甲醇至刻度,浸泡8h,超声处理30min,滤过,滤液用运行缓冲液稀释至适当浓度, 即得｡

4． 双波长反射法锯齿扫描测槐角丸中:芦丁的含量^[4]

薄层板的制备   精称60℃干燥6h的槐角丸粉末约1.75 g，置索氏提取器中，加甲醇70 ml，水浴回流至提取液无色(约12 h)，浓缩，定容至25 ml量瓶中。精称120℃干燥至恒重的芦丁对照品24.87 mg，置25 ml量瓶中，用甲醇溶解成0.994 8 mg/ml芦丁对照液。用定容毛细管精密吸取槐角丸供试液1µl，芦丁对照液分别点于同一块聚酰胺薄膜上，以乙酸乙脂一甲醇一甲酸((8. 5 : 1 : 1)展开，展距8 cm，冷风吹干后在紫外灯(365nm)下观察，槐角丸与芦丁在相同位置上显暗黄褐色荧光斑点。

扫描条件   采用测定芦丁λS=370 nm, λR=230 nm;反射法锯齿扫描测芦丁含量。

【性味与归经】  苦，寒。归肝、大肠经。   

【功能与主治】  清热泻火，凉血止血。用于肠热便血，痔肿出血，肝热头痛，眩晕目赤。  

【用法与用量】  6～9g 。  

【贮藏】  置通风干燥处，防蛀。

参考文献

[1]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京,化学工业出版社,2005:247.

[2]苗明三.现代实用中药质量控制技术 [M]. 人民卫生出版社第1版2000：1043～1044。

[3]连云岚，高天爱，张中苏.槐角丸中槐角的TLC鉴别及黄芩苷含量测定的研究 [J]. 药物分析杂志，2000，20（01）：57～58。

[4]韩梅海，成爱华. 高效液相色谱法测定槐角丸中黄芩苷含量[J]. 山东中医药大学学报,2002,26（02）:143～144。

[5]郑宏钧. 现代中药材鉴别手册 [M] .2000.8第一版：730。

[6] 毛维伦许腊英李顺超叶泽秀. 槐角炭质量标准的研究[J]. 湖北中医学院学报, 1999,1(2):43～45.

[7]徐兴鼎,杨育民,马新华,等. 槐角及其炮制品的芦丁含量和浸出物的测定. [J]. 中药通报，1998，13（5）：21。

[8]甄汉深,陈勇,陆中海.槐角丸含量测定的实验研究[J]. 中国药学杂志，1996,31（03）：166。

[9]杨士伟,许光亮,刘安军.用正交函数分光光度法测定槐角丸中芦丁和黄芩甙的含量 [J]. 西北药学杂志,1995，10（1）：59。

[10]肖怀，陈泽乃，陆阳. HPLC测定槐角中槐苷含量[J]. 大理学院学报，2003，02（3）:11～13。

[11]刘晓华,孙文基,李涛.高效液相色谱法测定槐角中槐角苷的含量 [J].药物分析杂志,2004.24(02)：160～162 。 

[12]丁昌成，刘义升，贾善学.反相高效液相色谱法测定槐角丸中黄芩苷的含量 [J]. 中国药业，2002，11（11）：39～40。

[13]王剑波，郭萍，赵小兵，等.RP-HPLC法测定槐角提取物中染料木素的含量 [J].中草药，2004，35(04)：402～403。 

[14]陈勇川，穆海川，刘松青.高效毛细管电泳法测定槐花和槐角中芦丁的含量 [J]. 华西药学杂志，2002，17（04）：284～285。