牡丹皮

本品为毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr 的干燥根皮。多系栽培。主产于安徽、湖南、山东、湖北、四川、甘肃、贵州等地。秋季采挖根部，除去细根，剥取根皮，干燥。药材以条粗、肉厚、断面色白、粉性足、香气浓者为佳。

【处方用名】      牡丹皮（丹皮）、牡丹皮炭

【规范方法】      牡丹皮    取原药材，除去杂质，抢水洗净，润透，切薄片，干燥。

牡丹皮炭       取牡丹皮片置锅内，用中火加热，炒至黑褐色时，喷洒少量清水，灭尽火星，取出，晾干，凉透。

【药典方法】      迅速洗净，润后切薄片，晒干。      

【量化方法】  牡丹皮  取原材料，除去杂质，抢水洗净，润透，切薄片，干燥。

牡丹皮炭  取牡丹皮，置锅底温度为200℃的锅内，不断翻动，当温度由146℃回升至266℃，药物变为黑褐色，用时约13分20秒，取出，灭尽火星，凉透。

药物炒用量 300g。

【成品性状】  牡丹皮  为圆形薄片，有纵向剖开的裂缝，两面向内卷曲，外表皮黄褐色，有除去支根后的残迹，内表面灰褐色，常见发亮的牡丹酚结晶。质硬而脆，易折断，断面色白，有特殊而浓厚的香气，味微苦凉。

丹皮炭  形如丹皮片，表面黑褐色，气香，味微苦而涩。

【鉴别】

1.显微鉴别  根皮横切面：①木栓层由多列细胞组成，壁浅红色。 = 2 * GB3 ②皮层菲薄，为数列切向延长的薄壁细胞。 = 3 * GB3 ③韧皮部占大部分。 = 4 * GB3 ④射线宽1~3列细胞。 = 5 * GB3 ⑤韧皮部、皮层薄壁细胞以及细胞间隙中含草酸钙簇晶，薄壁细胞和射线细胞中含色素或淀粉粒。

粉末：淡红棕色。 = 1 * GB3 ①淀粉粒众多，单粒呈类球形、半球形或多面形，直径3~16 μm。脐点点状、裂缝状、三义状或星状，复粒由2~6粒复合而成。 = 2 * GB3 ②草酸钙簇晶甚多，直径9~45 μm，含晶薄壁细胞排列成行；也有一个薄壁细胞中含数个簇晶，或簇晶塞于细胞间隙中。 = 3 * GB3 ③木栓细胞长方形，壁稍厚，浅红色。 = 4 * GB3 ④有时可见牡丹酚针状、片状结晶。

牡丹皮炭粉末黑褐色;淀粉粒显著地减少;几无完整的草酸钙簇晶,可见较多的草酸钙结晶的碎粒、碎块;黄色和黑色块状物众多。^[1,2]

2.理化鉴别

 2.1.取本品粉末进行微量升华，升华物在显微镜下呈长柱形、针状、羽状结晶，于结晶上滴加三氯化铁醇溶液，则结晶溶解而成暗紫色。

2.2.取本品粉末2g，加乙醚20 ml，振摇2分钟，滤过，去滤液5 ml，置水溶上蒸干，放冷，残渣中加硝酸数滴，先显棕黄色，后变鲜绿色。

2.3.取本品粉末2g，置50 ml的小烧瓶中，加蒸馏水15 ml，瓶口插有一玻璃导管的橡皮塞，加热煮沸，将产生的蒸汽导入盛有氯亚胺基2，6—二氯苯醌试剂（取氯亚胺基2，6—二氯苯醌0.1g，加硼砂3.2g，研磨均匀即得）0.1g与蒸馏水1ml中，2分钟内溶液呈蓝色。

2.4.丹皮酚鉴别反应:取各炮制丹皮炭品粉末2g，加乙醚20ml，振摇2 min,滤过，取滤液5 ml，置水浴上蒸干，放冷，残渣加硝酸数滴，先显棕黄色，迅速变为鲜绿色，证明有丹皮酚存在。^[3]

2.5.鞣酸鉴别反应:取各样品粉末0.2g，加水10 ml,温浸5min,滤过，取滤液1 ml，加FeCl₃试液1滴，均显淡绿棕色，则证明有鞣质存在。^[4]

3.光谱鉴别 

3.1.取本品粉末0.15g，加无水乙醇25ml，振摇数分钟，滤过，取滤液1ml，用无水乙醇稀释至25ml，在274nm波长处，有最大吸收。^[5]

3.2.粉末85%乙醇溶液（1：10）点于氯化铝薄层板上，置紫外灯下观察，显蓝绿色荧光。同法作乙醚溶液，显蓝绿色荧光。

4.色谱鉴别 

4.1. 取本品粉末1g，加乙醚10ml，密塞，振摇10分钟，滤过，滤液挥干，残渣加丙铜 2ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml 含5mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各 10μl，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以环己烷－醋酸乙酯(3:1) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性 5％三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点。^[5]

4.2. 取本品醋酸乙酯提取液，点于硅胶G薄层板上，以丹皮酚、芍药苷为对照品，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸-氯仿（5：6：3：6）展开，以对甲氧基苯甲醛硫酸试剂[对甲氧基苯甲醛-甲醇-硫酸（90.5：8.0：1.5）]喷雾加热显色。^[4]

4.3. 取本品粉末适量，以1mol/L盐酸甲醇溶液润湿后静置60分钟，加氯仿浸泡过夜，氯仿液点于硅胶G薄层板上，以丹皮酚为对照，以环己烷-氯仿-无水乙醇（7：3：1）展开，紫外光灯（365nm）下检视。^[6]

4．4．供试品溶液的制备: 取复方颗粒适量,研细后称取15ｇ,加乙醚40ｍｌ,水浴回流提取1ｈ,放冷,静置,倾取上清液,挥干,残渣加丙酮1ｍｌ使溶解,摇匀,即得。

丹皮酚对照品溶液的制备:取丹皮酚对照品,加丙酮制成每1ｍｌ含1ｍｇ丹皮酚的溶液,作为对照品溶液。

阴性对照溶液的制备:原方分别除去当归和丹皮,按制剂工艺制成阴性样品后,按供试品溶液的制备方法,分别制得阴性对照溶液。

薄层色谱鉴别:吸取供试品溶液、阴性对照溶液各20μｌ,对照药材溶液和对照品溶液各5μｌ,分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上,以环己烷 乙酸乙酯(9∶1)展开,展距12ｃｍ,取出,晾干。置紫外光灯(365ｎｍ)下检视,供试品色谱中,在与丹皮酚对照品色谱相应位置上,显相同颜色的斑点,丹皮的阴性对照溶液则无。^[7,8]

5.紫外谱线组法鉴别^[9]

6.显微定量分析^[1,2]

6.1　网格目镜测微尺的校正和盖玻片表面积的测定:依据显微测微尺的使用方法,用物镜测微尺对网格目镜测微尺进行校正,网格目镜测微尺均分为100小格,总面积为163×163μm2(物镜40×,目镜6×)。精密测出盖玻片的面积A=24.0×103×24.0×103μm。

各种测试液浓度及所用吸收度上限

溶剂	吸收度A 上限	原试液浓度 （g/ml）	稀释倍数	测试液浓度 （g/ml）
H2O	3.0	1.0×10-1	50	2.0×10-3
EtOH	3.0	1.0×10-1	25	4.0×10-3
CHCl3	2.5	1.0×10-1	5	2.0×10-2
Pet	2.7	1.0×10-1	1	1.0×10-1

牡丹皮紫外谱线组图谱数据

最大吸收峰位值 （nm）
	316.7sh	(309.8sh)	317.0	(322.5)
	273.8	271.7	275.7	315.3
	217.8	(233.5)	242.8	273.3
		227.0		262.5
				(236.0sh)
				228.2
				218.5

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

6.2　混悬液的制备:取干燥的实验材料适量,用铜冲钵捣碎,过100目筛。称取Wmg(生药称取100mg,炭药根据炒炭后收得率称取相应重量),置刻度试管中,加入分散溶剂(牡丹皮及其炭药以稀甘油为分散溶剂)定容至5.0ml,振摇,使混悬均匀。

6.3　制片:用微量刻度吸管吸取0.06ml的混悬液装片,制得的玻片要求混悬液在盖玻片下分布均匀,无气泡,不外溢,每个样品装制5张玻片。

6.4　计数:每块盖玻片均分为9个区域,在每个区域内以网格目镜测微尺100小格为一个测量单位面积,数取网格中显微特征微粒(牡丹皮及其炭药以淀粉粒为显微特征微粒)的个数,每个区域内取1个数值,共取9个数,设其总数为N。

6.5　计算:计算每毫克药材所含显微特征微粒个数P(个/mg)。结果见表。

表　生药及炭药的显微定量分析结果

【检查】   

1.水分 

用甲苯法测定  取供试品适量，精密称定，置A瓶中,加甲苯约200ml，必要时加入玻璃珠数粒，将仪器各部分连接，自冷凝管顶端加入甲苯，至充满B管的狭细部分。将A瓶置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热,待甲苯开始沸腾时，调节温度，使每秒钟馏出2滴。待水分完全馏出，即测定管刻度部分的水量不再增加时,将冷凝管内部先用甲苯冲洗, 再用饱蘸甲苯的长刷或其他适宜的方法，将管壁上附着的甲苯推下，继续蒸馏5分钟，放冷至室温，拆卸装置，如有水黏附在B管的管壁上，可用蘸甲苯的铜丝推下，放置，使水分与甲苯完全分离。检读水量，并计算供试品中的含水量（%），不得过13.0％。

2.总灰分  先将本品粉碎，通过二号筛，混合均匀后，取供试品2～3g，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量(准确至0.01g)，缓缓炽热，注意避免样品粉末燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600℃，使完全灰化并至恒重。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（%），不得过5.0％。  

【含量测定】

1.超临界流体萃取法——毛细管气相色谱法测定牡丹皮中丹皮酚的含量^[10]

色谱条件       交换石英毛细管柱（40m×0.53mm，自制），固定相：SE-30，气化室：240℃，检测室：280℃（FID），载气：N 2 并加尾吹N 2，柱温：100℃（4 min）以20℃·min-1升至210℃保持5min，进样量：0.5μl。

供试品溶液的制备    精称适量本品粉末，在温度90℃；压力28MPa；改性剂（氯仿）0.5ml；动态萃取体积3ml；静态萃取时间5min。然后精密加入1ml内标溶液于吸收液中，氯仿定容至10ml，即得。

2.胶束电动毛细管色谱法测定牡丹皮中丹皮酚的含量^[4]                                                                                                 

色谱条件       Unimicro毛细管电泳仪；毛细管（75μm i.d.，总长55cm，有效长度50cm，）。检测波长274nm，毛细管电泳仪电压15kV，背景电解质分别为30mol/L SDS-30mol/L硼砂，20mol/L SDS-50mol/L硼砂（PH9.4）。

对照品溶液的制备       精确称取丹皮酚对照品12.0mg于100ml量瓶中，用95%乙醇溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液a；取丹皮酚对照品9.1mg于10ml量瓶中，无水乙醇溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液b；称取芦丁68mg，用95%乙醇溶解并稀释至100ml，作为内标a；称取芦丁52mg，用无水乙醇溶解并稀释至100ml，作为内标b。

供试品溶液的制备       将本品粉碎，称取0.2g，加95%乙醇30ml，浸泡12h，超声波振荡提取30min，定容至50ml，取该溶液4ml，加入内标a 1ml，95%乙醇稀释至10ml，作为供试品溶液。

3.HPLC法

3.1.测定丹皮中丹皮酚的含量

3.1.1. 色谱条件与系统适用性试验    色谱柱：NOVA-PAKC18 （3.9mm×150mm，5μm）；流动相：甲醇-水（1：1）；流速：0.7ml/min；检测波长：274nm；柱温：室温。

对照品溶液的制备       取丹皮酚对照品用甲醇溶解成0.1mg/ml的溶液。精密称取内标物非那西汀用甲醇溶液成0.8mg/ml的溶液，作为内标溶液。吸取适量丹皮酚对照品溶液置于10ml量瓶中，加入内标液0.5ml用甲醇稀释至刻度，摇匀。

供试品溶液的制备       取本品粉末（真空干燥24h，60目过筛）约10mg，精密称定，置于10ml刻度离心管中，加含有内标（非那西汀40μg/ml）的甲醇液10.0ml，超声波振荡30min，滤过，弃去初滤液，取续滤液10μl进行分析。

测定法    分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 l，注入液相色谱仪，测定即得。

3.1.2.色谱条件与系统适用性试验      仪器     LC-10A液相色谱仪，SPD-10A可见紫外检测器，C-R3A数据处理机。色谱柱：Sperisorb C18柱；流动相：甲醇-水（65：35）；流速：1ml/min；检测波长273nm。

对照品溶液的制备       精密称取丹皮酚对照品用甲醇溶解成8μg/ml的溶液。

供试品溶液的制备       取本品粉末（真空干燥，40目）约10mg，精密称定，加入甲醇10ml，超声振荡20min；离心。

测定法    分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定即得。^[11]

3.1.3.色谱条件　色谱柱为shim-packＶＰ-ＯＤＳ150mm×4.6mm;流动相为甲醇-水(65∶35);流速1ml/min;检测波长为274nm。

对照品溶液的制备　精密称取丹皮酚对照品适量,用甲醇溶解成16μg/ml的溶液，即得。

样品测定　取本品粉碎,过3号筛,称取粉末约25mg,至25ml容量瓶中,加甲醇适量,超声提取30min,放冷,加甲醇至刻度,滤过,取10μl进样。^[12]

3.2.测定牡丹皮中芍药苷的含量^[6]

色谱条件          色谱柱：日立3050型ODS柱（4mm×150mm）；流动相：水-乙腈（85：15）；流速：1.0ml/min；柱温：室温；检测波长：230mm。

对照品溶液的制备           精密称取O-乙氧基苯甲酰胺（内标物）5mg，加乙腈溶解并定容至50ml，即为内标溶液；精密称取芍药苷对照品用水溶解成0.2mg/ml 的溶液。准确吸取该液5ml，定量加内标液5ml并用水稀释至20ml，即为对照品溶液。

样品测定          精密称取过40目筛本品粉末1g，加水40ml，室温超声振荡提取30分钟，离心，分取上清液。残渣加水5ml振摇，离心，分取上清液，同法重复1次。合并上清液，加水调整体积至50ml。准确量取5ml，通过聚酰胺柱（柱色谱用聚酰胺2g干法装柱，内径12mm），每次加水3ml洗脱，收集洗脱液15ml，准确加内标溶液5ml，即为供试品溶液。供试品溶液、对照品溶液各进样20μl，按色谱条件测定，分别求出各自色谱图中芍药苷与内标物峰的比值（自动积分比、峰高比或峰面积比）T和S，按下式计算含量：

4.反相高效液相色谱法测定丹皮酚的含量

4.1.色谱条件与系统适用性试验  色谱柱为Lichrospher C18柱（4.6mm×250mm，粒径5μm）；流动相：甲醇-乙腈-水（30：40：30）；流速：0.8ml/min；检测波长：274nm；柱温：25℃；进样量：20μl；灵敏度：0.02AUFS，理论塔板数按Pae峰计算不低于4000。

对照品及供试品溶液的制备       精密称取丹皮酚对照品和原料药用甲醇溶解成0.1mg/ml的溶液，避光，置2-8℃冰箱中备用。

 测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定即得。^[13]

4.2色谱条件   色谱柱为kromasilods(5μｍ,4 6ｍｍ×200ｍｍ),乙腈-水(50∶50)为流动相,流速1.0ml/min,柱温30℃,检测波长为254nm,进样量为10μl。

对照品溶液的制备   精密称取丹皮酚对照品适量,加甲醇制成0.05mg.ml的溶液,摇匀,即得。

样品溶液的制备   精取本品细粉约0.1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,称定重量,超声处理30分钟,放冷,用甲醇补足减失重量,过滤,取续滤液作为供试品溶液。^[14]

5.分光光度法测丹皮酚的含量^[5]

取本品粗粉约0.2g，精密称定，用水蒸气蒸镏，收集馏出液约 450ml，加水至 500ml，摇匀。照分光光度法，在274nm 的波长处测定吸收度，按丹皮酚的吸收系数（E1% 1cm）为862 计算，即得。

本品按干燥品计算，含丹皮酚不得少于1.20％。

6.薄层扫描法测定牡丹皮中丹皮酚的含量

6.1. 色谱条件  薄层板的制备：取八块干燥的硅胶板，浸于1.92%二苯基甲硅氧乙烷的甲苯溶液260ml中，室温放置72小时后，薄层板以甲苯、氯仿和甲醇洗脱几次，然后于70℃真空干燥48小时，得到二苯基处理的高效薄层板。展开剂：乙腈-水（80：20）；检测波长：275nm。

样品测定          准确称取牡丹皮5mg，加甲醇25ml，于50℃热水浴加热并搅拌30分钟，同法再提取三次，提取液转移至100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为供试品溶液。于距底边1.5cm处点供试品溶液，室温下展开，展距7cm，挥散溶剂，进行扫描测定。

6.2：扫描条件  双波长反射法锯齿扫描，狭缝1.2×1.2mm, SX= 3，灵敏度:中. 薄层层析条件： 取硅胶G. 0.8%CMC-Na (1: 25),湿法铺板，使用前活化(110℃)半小时。    展开剂:甲苯一乙酸乙酯-甲酸-氯访(10： 12： 3.5：12)。    显色剂:2%三氯化铁乙醇溶液，显色后与样品呈褐色斑点。

样品液的制备  将本品根皮. 茎打粉，于40℃烘5h，精密称取根皮6 g,茎皮8g，将根皮、茎分别加盐酸甲醇溶液(取5m1盐酸36%用甲醇定容于50m1容量瓶中)10ml。浸泡24小时，置索氏提取器中用氯仿250m1提取5小时，提取液浓缩后定容于10ml容量瓶中.

标准溶液的制备    精密称取丹皮酚标准品用氯仿制成5. 91 mg/ ml的溶液。^[15]

6.3：薄层扫描条件:扫描方式,反射法锯齿扫描;波长:λs=274nm,λ_R=365nm;扫描速度:20mm/min;狭缝:1.25×1.25mm;线性校正:Sx=3,灵敏度×2 层析条件:20×20cm硅胶G板,厚0.3mm,展开溶剂:环己烷∶氯仿∶无水乙醇(7∶3∶1);点样量:5μl。

样品溶液的制备  精密称取过40目筛本品粉末3g, 盐酸∶甲醇(1∶1)4ml,浸润1h,加氯仿50ml,放置24h,过滤。以少量氯仿洗涤残渣,合并氯仿液,移至50ml容量瓶中,氯仿定容。

对照品溶液的制备 精密称定丹皮酚对照品用无水乙醇溶解成1mg/ml的溶液。

测定法  分别精密吸取样品及丹皮酚对照品的溶液各5μl,交叉点于同一硅胶薄板上,按层析条件展开,扫描测定,得峰面积积分值,用外标法计算丹皮中丹皮酚含量。^[16]

7. 滴定法测定牡丹皮中鞣酸的含量^[3]

精称本品粉末5 g，分6次加入50%丙酮振摇浸提(100×2,50×4)，合并浸提液，添加丙酮至400 ml,精密吸取1 mol/L乙酸锌溶液20 ml，置500 ml容量瓶中，加饱和氨水14 m1，摇匀使白色沉淀溶解，将上述浸提液加温至(35士2) ℃，缓缓移人容量瓶中，不断振摇1 min，置原水浴(35士2)℃上继续温热30 min(间歇振摇数次)，冷至室温，加50%丙酮至刻度，摇匀，过滤，弃去初滤液，精密吸取续滤液20 ml,置500 ml三角烧瓶中，加蒸馏水300 ml, pH10缓冲液，络黑T指示剂1 ml，然后以0. 05 mol/L EDTA标准液滴定，溶液由红色变至蓝色即为终点，另作空白试验.按下式计算结果。

鞣酸含量=

    式中:Mzn。为ZnAC₂的摩尔浓度，M_EDTA为EDTA的摩尔浓度，V _EDTA为消耗EDTA的毫升数，m为样品的克数。

8. 反相薄层色谱分析牡丹皮中丹皮酚和芍药甙的含量^[17]

供试液制备:取粉碎过60目筛的本品，干燥，准确称取2.5g,置50m1碘量瓶中，加入20m170%的甲醇水溶液浸泡8h,置超声波清洗机上提取30min,离心15min.取上清液点样。

丹皮酚标准溶液的制备： 取丹皮酚对照品适量用甲醇配制成1mg/ml溶液。

芍药甙标准溶液：  取芍药甙对照品适量用甲醇配制成6mg/ml溶液。

反相薄层层析条件    CS-930薄层扫描仪最大吸收波长(λ_max)分别为： ，RP-18F₂₅₄高效反相薄层板。70%四氢呋喃溶液(含0.1%四丁基溴化铵)浸渍，干燥，以四氢呋喃:水为42--58(含0. 1%四丁基溴化铵)为展开剂，展距4.5cm. UV254nm波长下定位，芍药试可获得较好分离，但丹皮酚斑点与相邻的另一斑点相隔较近.用同一展开剂在同一方向第二次展开，展距

2.5cm，丹皮酚可获得较好分离。

测定法  牡丹皮样品供试液用点样器点样1μ1，点成2mm条状，按上述条件展开，反相薄层扫描测定样品中丹皮酚Pa. 芍药甙的含量。

【性味与归经】  苦、辛，微寒。归心、肝、肾经。

【功能与主治】  清热凉血，活血化瘀。用于温毒发斑，吐血衄血，夜热早凉，无汗骨蒸，经闭痛经，痈肿疮毒，跌扑伤痛。

【用法与用量】  6 ～12g 。

【贮藏】  置阴凉干燥处。

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