高效液相色谱法测定皮疹清颗粒中黄芩苷的含量

 

芦金清¹ ,余南才² , 李竣¹ , 胡克菲² ,赵享法¹    (1 .湖北中医学院药学系, 湖北武汉 430061;2 .武汉市第一医院, 湖北武

 

汉 430022)

 

[  摘要]  目的:建立用高效液相色谱法测定皮疹清颗粒中黄芩苷含量的的方法。 方法:采用 N ucleosil C18 , 流动相为乙腈-1 %

 

醋酸(26 74), 流速为1 .2 ml·min^-1 , 紫外检测波长为 276 nm 。 结果:黄芩苷浓度线性范围为 15 ～ 41 μg , r 为0 .9994, 平均回收

 

率为99 .16 %, RSD 为0 .92%(n =6)。 结论:本法操作简便, 准确, 重复性好, 可作为该制剂的定量分析方法。

 

[  关键词]  皮疹清颗粒;黄芩苷;含量测定

 

[ 中图分类号] R927 .2        [ 文献标识码] A         [ 文章编号] 1001-5213(2001)11-0661-03

 

Determination of baicalin in Pizhenqing granules with HPLC

 

LU Jing-Qing , YU Nan-Cai ,HU Ke-Fei ,et al (Hubei college of T raditional Chinese Medicine , Hubei Wuhan 430061)

 

ABSTRACT :OBJECTIVE T o establish a method for determining the content of baicalin in Pizhenqing granules by HP LC.METH-ODS A nucleosil C18 column w ith acetonitrile-1% acetic acid solution (26 74)as the mobile phase was used .The flow rate was 1 .2 ml·min ^-1 and the detective wavelength was 276 nm .RESULTS T he calibration curve w as linear at the range of 15 ～ 41 μg for baicalin (r =0.9994).T he average recovery w as 99 .16% and RSD w as 0.92 %(n =6).CONCLUSIONS T he method is simple ,

· 662 ·                                              中国医院药学杂志 2001 年第 21 卷第 11 期 Chin Hosp Pharm November , 2001 Nov , Vol 21 , No .11

 

and accurate and can be used as quantitative method for this preparation .

 

KEY WORDS:Pizhenqing ;Granules;baicalin ;determination

 

 

皮疹清颗粒是武汉市一医院临床应用多年的自制制剂,其处方是由黄芩 、野菊花、赤芍 、甘草等九味中药组成 ,具有清热除湿 ,凉血解毒的功效。该药用于毒热型、湿热型皮炎的治疗 , 其效果显著^{[ 1]} 。为了有效地控制本品质量, 采用 HPLC 法测定了该制剂中黄芩苷的含量 ,为皮疹清颗粒的质量控制提供了快速、准确的测定方法。

 

1       仪器与材料

 

1  .1  仪器 Shimadzu LC -6A 高效液相色谱仪 ;

 

7105 六通进样阀;SPD -6AV 紫外检测器;C - R3AX 色谱数据微处理机 ;UV -2100 型紫外分光光度仪。

 

1 .2 材料 黄芩苷对照品由中国药品生物制品检定所提供;样品(武汉市第一医院中西医结合研究

 

所 ,批号:990212 ,990302 ,990312);所用试剂均为分析纯。

 

2  方法与结果

 

2 .1  条件选择

 

2 .1.1  测定波长的选择 黄芩苷对照品甲醇溶液

 

与皮疹清颗粒的甲醇提取液在276 nm 处均有最大吸收 ,故选择 276 nm 作为检测波长。

 

2 .1.2  色谱条件      色谱柱:Nucleosi C18柱(4 .6 mm

 

×250 mm , 10 μm);流动相 :乙腈-10 %醋酸(26 74);流速1 .2 ml·min^-1 ;检测波长 276 nm ;柱温 30 ℃;灵敏度0 .08 AUFS ;进样量 10 μl。

 

2 .1.3 提取条件的选择 根据黄芩苷的性质及颗粒剂常用提取方法, 考察了超声提取,加热回流及水溶醇提方法 ,并对不同溶剂和提取时间进行了综合考察 ,结果以甲醇超声处理1 h的提取方法为最佳。

 

2 .2 对照品溶液与供试品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷干燥器中减压干燥24 h的黄芩苷对照品适量 ,加甲醇溶解并制备成 1 ml 含黄芩苷 30 μg 的溶液,即得对照品溶液;另取供试品约0 .3 g ,精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇 50 ml , 称定重量, 超声提取 1 h ,放置至室温 ,再称定重量, 补足减失的重量 , 滤过 , 弃去初滤液, 精密量取续滤液 1 ml , 置 5 m l 量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 , 即得供试品溶液。

2 .3  线性关系考察     精密吸取黄芩苷对照品溶液

 

0 .6,0 .8, 1 .0, 1 .2, 1 .4, 1 .6 ml ,各置于 10 ml 量瓶

 

中 ,用甲醇稀释至刻度, 摇匀 ,各进样 10 μl, 以测得的色谱峰面积为纵坐标, 对照品量为横坐标绘制标准曲线 。结果为进样量在 15 ～ 41 μg 范围内呈线性

 

 

关系 。回归方程为 Y =3859 .94 X -25881 .6, r = 0 .9994 。采用外标一点法测定含量。

 

2 .4 精密度试验 精密吸取同一黄芩苷对照品溶液10 μl, 按上述色谱条件重复进样 5 次, 测得峰面积分别为 95239 , 96418 , 93562 , 94117 , 96554 , 其 A =95176 ,RSD 为1 .4%(n =5)。

 

2 .5 稳定性试验 分别精密吸取同一黄芩苷对照品溶液和同一批号的供试品溶液, 按色谱条件分别于制备后0 , 4 , 6 ,8 , 24 h 进行测定。结果为对照品溶液含量分别是28 .6, 28 .3, 28 .9, 29 .0, 29 .4 μg · ml ^-1 , x =28 .8, RSD =1 .47 %(n =5);而供试品溶

 

液含量分别是21 .56 , 21 .67 , 20 .98 , 21 .70 , 21 .45 mg·g ^-1 , 其 x =21 .47 , RSD 为1 .36 %(n =5),表明

 

黄芩苷含量在 24 h 内基本稳定。

 

2 .6  空白试验     按处方配比投入缺黄芩的空白样

 

品 ,按供试品溶液配制的方法提取,并按上述色谱条件测试, 结果在黄芩苷出峰位置未见其它杂质的干扰峰(见图 1), 说明按本文的实验条件测定, 缺样空白无干扰。

 

 

 

 

 

 

 

图 1  HPLC 图谱

 

a.对照品     b .样品    c.空白样品

 

2 .7 重复性试验 精密称取同一批号(990212)的样品 5 份,按供试品溶液制备方法制备,并按以上色谱条件测试, 测得样品含量值分别为20 .88 , 21 .17 ,

20  .97 ,21 .30 mg·g ^-1 ,其 x =21 .02 , RSD 为0 .98 % (n =5)。

2 .8 回收率试验 精密称取已知含量的皮疹清颗粒为0 .12 g ,精密添加一定量的黄芩苷对照品, 按供试品溶液制备法制备, 并按以上色谱条件测试。结果见表 1 ,平均回收率为99 .16 %, RSD 为0 .92 %(n

 

=6)。

 

表 1    加样回收率测定结果

 

样品	样品中黄芩苷量/ mg	加入量/ mg	测得量/ mg	回收率/ %
1	2 .920	2 .539	5 .434	91	.02
2	2 .325	2 .536	4 .877	100	.51
3	2 .826	3 .006	5 .766	97	.80
4	3 .372	3 .006	6 .370	99	.73
5	2 .933	3 .006	5 .907	98	.94
6	2 .340	3 .006	5 .314	98	.94

 

2 .9    样品测定 分别精密称取不同批号的皮疹清